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[00335684]基因重组二磷酸核苷激酶表达及催化特性的研究

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类型: 非专利

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技术详细介绍

二磷酸核苷激酶通过磷酸化可将dADP、dCDP、dGDT、dTDP、dUDP转化成相应的三磷酸脱氧核苷(dNTP),三磷酸脱氧核苷是各种DNA聚合酶促反应的底物,在三磷酸脱氧核苷的生产过程中,可通过重组酶的作用直接还原三磷酸腺苷(ATP)、三磷酸胞苷(CTP)、三磷酸鸟苷(GTP)而高效得到脱氧三磷酸腺苷(dATP),脱氧三磷酸胞苷(dCTP),脱氧三磷酸鸟苷(dGTP)(该项目主持人为该项技术的发明人),而二磷酸核苷激酶则是生物体内另外一条调节三磷酸脱氧核苷水平的途径,这个过程中的催化TDP转化为TTP的过程尤其有意义。因为自然界不存在核糖型的三磷酸胸苷,因此无法通过上述方式得到脱氧三磷酸胸苷(TTP)。这样在三磷酸脱氧核苷的生产中,TTP主要通过由TMP转化为TDP,再由TDP转化为TTP来获得,这也是生物体内调节TTP进而调节DNA合成的一个重要途径。而目前催化TDP到TTP的过程主要是通过天然的激酶来进行,这些激酶的来源有限,提取困难,成本很高,成为三磷酸脱氧核苷生产中的一个瓶颈。该项目的完成将大大提高二磷酸核苷激酶的表达量,从而可高效低成本的完成TDP等其他二磷酸脱氧核苷的转化,解决了三磷酸脱氧核苷生产中有关瓶颈的主要问题。该项目的关键技术是利用重组二磷酸核苷激酶催化由TDP合成TTP。

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