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在南极假丝酵母脂肪酶B黑曲霉工程菌的研发中,我们的主要目的是融合蛋白策略在黑曲霉中分泌表达密码子优化的南极假丝酵母脂肪酶B,根据表达结果判断产业化生产的可行性。主要技术需求分为三点: 1、合成南极假丝酵母脂肪酶B基因CALB,并对其进行密码子优化。 2、使用6R强启动子、glaA信号肽优化的表达策略,将CALB基因重组至黑曲霉糖化酶基因位点,获取纯合重组菌株。 3、发酵测试重组菌株的南极假丝酵母脂肪酶B的表达量、酶活力、酶学性质,为进一步优化南极假丝酵母在黑曲霉中的表达做实验基础。 目前,国内外对南极假丝酵母脂肪酶B的研究较为成熟,包括其氨基酸序列、立体三维结构和催化机理等都已获得解析,同时该酶的基因也已成功实现了克隆表达。但是天然的 CALB 仍存在一定的缺陷,如热稳定性较差、产量较低等,使其在生产实践中的应用受到一定限制。因此,为改善 CALB 相应的酶学特性,提升催化能力,提高其反应稳定性,我们利用黑曲霉为生产菌株对该项目展开研究。
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